使用带集成过滤器的研磨袋的主要好处是在初始均质化阶段有效去除物理碎屑。通过将蜂体和几丁质外骨骼等粗颗粒物与液体样品分离,这些袋子可以产生明显更清晰的裂解液。此初步过滤步骤对于防止下游DNA提取过程中的机械问题至关重要。
集成过滤器袋可自动将固体杂质与富含DNA的液体分离,作为离心和纯化步骤中堵塞的保护措施。
优化样品清晰度
保留粗颗粒物
从蜜蜂样品中提取DNA涉及分解坚韧的生物材料。带集成过滤器的研磨袋旨在物理保留大的固体杂质。
这有效地将蜂体和几丁质外骨骼碎片截留在袋中。通过将这些碎屑包含在内,过滤器可以防止它们与将用于提取的液体相混合。
生产更清洁的裂解液
由于固体大部分被过滤器阻挡,通过的液体比标准匀浆液要清晰得多。
这种液体含有目标DNA,但没有通常由压碎昆虫产生的重沉淀物。这种分离与研磨过程同时发生,无需额外的手动步骤。
保护下游工作流程
防止柱堵塞
许多DNA提取方案使用对阻塞敏感的离心柱或过滤膜。
从这些袋子中获得的预过滤液体大大减少了引入这些柱的颗粒负载。这最大限度地减少了孔被阻塞的风险,这可能会损坏样品或中断过程。
提高离心性能
当样品含有大量碎屑时,离心可能无法有效沉淀固体,或者可能导致上清液难以干净地吸出。
使用过滤袋可确保进入离心机的液体已基本不含大颗粒物。这可以实现更清晰的分离,并减少液体处理过程中转移污染物的可能性。
理解权衡
成本与吞吐量
带集成过滤器的袋子通常比标准无过滤器的研磨袋贵。
然而,对于大批量处理,由于避免了柱堵塞和重新提取所节省的时间,通常可以抵消这种成本。对于非常小、预算有限的实验,可能需要证明增加的成本是合理的。
液体保留
过滤器膜和截留的碎屑可能会物理保留少量裂解缓冲液。
重要的是要确保添加的初始缓冲液体积足以弥补这种轻微的损失,以确保您获得足够的液体用于后续步骤。
为您的目标做出正确选择
要确定过滤袋是否对您的鼻疽虫提取工作流程至关重要,请考虑您的具体限制:
- 如果您的主要重点是处理速度和可靠性:使用集成过滤器袋,以最大限度地减少高通量工作流程中堵塞和停止的风险。
- 如果您的主要重点是严格降低耗材成本:您可以选择标准袋,但要准备好更仔细的手动移液以避免碎屑转移。
部署过滤研磨袋基本上是用耗材成本的小幅增加来换取工艺稳定性和样品纯度的显著提高。
总结表:
| 特征 | 鼻疽虫提取的好处 | 对工作流程的影响 |
|---|---|---|
| 集成过滤 | 去除几丁质外骨骼和蜂体 | 防止离心柱机械堵塞 |
| 自动化分离 | 同时研磨和截留碎屑 | 无需手动过滤步骤,节省时间 |
| 提高裂解液清晰度 | 产生不含重沉淀物的液体相 | 提高离心效率和沉淀效果 |
| 工艺稳定性 | 减少敏感膜中的颗粒负载 | 最大限度地减少样品损失和重新提取率 |
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参考文献
- Ingemar Fries, Geoffrey R. Williams. Standard methods for<i>Nosema</i>research. DOI: 10.3896/ibra.1.52.1.14
本文还参考了以下技术资料 HonestBee 知识库 .