高转速离心机在蜂蜜预处理中的主要作用是目标浓缩。通过产生约 12,000 x g 的离心力,该设备可有效地将稀释的蜂蜜溶液中的病原体细胞、孢子和其他不溶性成分沉淀下来。这种机械分离将生物学目标与液体基质分离,形成适合下游分析的浓缩沉淀物。
核心见解:蜂蜜是一种体积大且复杂的基质,病原体通常含量极少。高转速离心机弥合了样品体积和检测限之间的差距;它将大样品的生物学成分压缩成高密度沉淀物,直接提高 DNA 浓度,最大限度地提高诊断测试的灵敏度。
病原体富集机制
克服蜂蜜基质
蜂蜜粘稠且化学成分复杂。在开始分析之前,通常会对样品进行稀释以降低粘度。
即使在稀释状态下,细菌和孢子仍然悬浮。高转速离心机施加巨大的力来克服这种悬浮状态,将固体生物物质驱动到离心管底部。
12,000 x g 的必要性
标准的过滤或低速离心通常不足以处理微生物目标。
为了有效沉淀小的细菌细胞和顽强的孢子(例如引起腐臭病的孢子),需要约 12,000 x g 的力。这个特定的阈值确保即使是轻质的生物颗粒也能被捕获在沉淀物中。
对诊断性能的影响
提高 DNA 产量
这种预处理的最终目标通常是用于 PCR 或测序的 DNA 提取。
通过丢弃上清液(顶部的液体层)并保留沉淀物,您可以有效地增加可用于提取的目标基因拷贝数。此步骤将低浓度样品转化为高浓度输入。
提高灵敏度
诊断仪器有检测限(LOD)。
如果病原体含量非常低,直接检测蜂蜜可能会产生假阴性。离心浓缩可将样品浓度提高到 LOD 以上,确保微量污染被准确标记。
区分应用和权衡
分析离心与工业离心
将实验室预处理与工业加工混淆是至关重要的。
工业离心机用于从蜂巢框中提取蜂蜜,使用较低的速度以保持物理结构并去除蜡等粗糙杂质。相比之下,此处讨论的高转速离心机是实验室级仪器,仅用于微生物分离,而非大批量食品加工。
离心机的局限性
虽然离心可以浓缩固体,但它不能去除溶解在液体中的化学污染物。
例如,如果您正在检测杀菌剂或可溶性抗生素,仅靠离心是不够的。这些工作流程通常需要高速涡旋和溶剂萃取(乳化),而不是沉淀。
为您的目标做出正确选择
在建立蜂蜜分析方案时,请确保您的设备与您的特定目标分析物相匹配。
- 如果您的主要重点是病原体检测(细菌/孢子):优先选择能够达到至少 12,000 x g 的离心机,以最大限度地沉淀生物细胞以进行 DNA 提取。
- 如果您的主要重点是物理纯度(收获):使用工业级离心机以较低的速度将蜂蜜与蜂巢分离,而不会破坏蜂巢结构。
- 如果您的主要重点是化学残留物(农药):将重点转移到高剪切力涡旋混合器上,以促进液-液萃取而不是固-液分离。
成功的病原体检测不仅取决于测试本身,还取决于测试开始前的机械样品浓缩。
总结表:
| 特征 | 实验室预处理 | 工业加工 |
|---|---|---|
| 主要目标 | 病原体/微生物分离 | 蜂蜜提取/杂质去除 |
| 所需力 | 高转速(约 12,000 x g) | 低至中速 |
| 样品状态 | 稀释的液体基质 | 大批量原蜜/蜂巢 |
| 输出 | 浓缩的生物沉淀物 | 澄清的液体蜂蜜 |
| 关键结果 | PCR 的 DNA 产量增加 | 物理纯度提高 |
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参考文献
- Mariko Okamoto, Daisuke Takamatsu. A novel multiplex PCR assay to detect and distinguish between different types of <i>Paenibacillus larvae</i> and <i>Melissococcus plutonius</i>, and a survey of foulbrood pathogen contamination in Japanese honey. DOI: 10.1292/jvms.21-0629
本文还参考了以下技术资料 HonestBee 知识库 .
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