液氮冷冻杀灭幼虫（LNKB）法是量化蜜蜂卫生行为的明确技术标准。该方法通过使用极寒来杀死蜂巢内特定区域的幼虫，从而创造一个受控的“感染”场景。这使得育种者能够客观地衡量蜂群识别和清除死亡幼虫的速度，为选择抗病遗传谱系提供了直接的指标。
LNKB的核心价值 虽然存在测试蜂群健康的机械方法，但液氮方法是独特的，因为它在杀死幼虫的同时不会损坏蜂巢的蜡盖。这迫使工蜂仅通过嗅觉线索来检测死亡的幼虫，从而最精确地测量自然疾病抑制所必需的“卫生行为”性状。
该方法的工作原理
创建受控隔离区
要进行此项测定，将一个圆筒或5x5厘米的金属方管压入蜂巢中一片封盖的子脾区域。
该管起着关键的隔离作用。它确保在倒入液氮时，液氮仅冷冻目标区域——通常影响约100个细胞——而不会溢出伤害邻近健康的幼虫。
模拟病原体感染
液氮在极低的温度下迅速杀死细胞内的幼虫。
至关重要的是，这模拟了疾病爆发（如美洲幼虫腐烂病或石灰病）的生物学现实，即幼虫在细胞内死亡。它为不同蜂群提供了统一的刺激，确保每个测试对象都面临完全相同的挑战。
量化清除速度
一旦幼虫被冷冻，蜂群就被留下来处理死亡的幼虫。该方法的重要性在于清除速度。
技术人员通常在24小时后返回，计算有多少细胞被揭盖并清理干净。清除高比例冷冻幼虫速度快的蜂群被归类为“卫生”。
为什么结构完整性很重要
测试检测能力，而不仅仅是修复能力
主要参考资料强调，LNKB保留了蜂巢细胞的物理结构。
与可能刺穿蜡盖的机械方法不同，液氮能保持细胞完好无损。这一点很重要，因为它迫使工蜂通过蜡盖的嗅觉（嗅觉）来检测死亡的幼虫，而不是仅仅对可见的孔洞或结构损坏做出反应。
分离卫生性状
通过保持细胞的结构完整性，LNKB方法分离了检测和清除这一特定行为性状。
这使其成为选择能够及早识别螨虫或真菌感染等疾病的品系的更优越的替代方法，在疾病在蜂群中传播之前。
理解权衡
后勤与安全
虽然LNKB方法非常准确，但需要使用液氮和专门的设备。
与使用简单昆虫针机械刺穿和杀死幼虫的“针刺法”相比，这增加了后勤复杂性和安全风险。
嗅觉与机械刺激
区分测试中使用的刺激很重要。
针刺法引入了机械损伤（盖子上的孔），这可能会触发修复反应，而不是纯粹的卫生反应。LNKB方法严格依赖蜜蜂感知死亡幼虫代谢变化的能力，使其成为社会免疫的更严格测试。
根据您的目标做出正确的选择
液氮方法的重要性在于其在遗传选择方面的精确性。以下是如何应用这一理解：
- 如果您的主要重点是培育优良品系：依赖LNKB方法。它能够保持细胞盖完好无损，确保您选择的是具有嗅觉检测这一特定遗传性状的品系，该性状与抗病性最相关。
- 如果您的主要重点是比较研究：使用LNKB以确保统一的刺激。标准化杀死约100只幼虫，创造了一个一致的基线，可以对不同蜜蜂物种或营养补充剂进行有效比较。
最终，液氮方法是将“蜂群健康”这一抽象概念转化为可量化、可选择的遗传性状的最有效工具。
总结表：
| 特征 | 液氮（LNKB）法 | 针刺法 |
|---|---|---|
| 刺激类型 | 嗅觉（气味） | 机械（物理损伤） |
| 细胞盖 | 保持完整 | 刺穿 |
| 精确度 | 高（明确标准） | 中等 |
| 主要用途 | 遗传育种与研究 | 一般现场筛选 |
| 主要优点 | 测试对病死幼虫的检测能力 | 简单且成本低廉 |
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参考文献
- Stephen F. Pernal, Andony Melathopoulos. Breeding for hygienic behaviour in honeybees (Apis mellifera) using free-mated nucleus colonies. DOI: 10.1007/s13592-011-0105-x
本文还参考了以下技术资料 HonestBee 知识库 .
