严格要求使用高浓度乙醇和低温储存,以立即阻止生物衰败。 这种双重方法可快速固定物理组织并停止酶活性。通过创造一个抑制微生物生长和化学反应的环境,您可以确保样本保持与活体组织近乎相同的状态,从而进行准确的形态学和遗传学分析。
化学固定和热稳定性的结合就像一个生物“暂停按钮”。它将细胞结构固定在原位,并防止 DNA 片段化,从而确保了翅膀几何形态测量学和基因组提取数据的可靠性。
高浓度乙醇的作用
高浓度乙醇是主要的化学防腐剂。它不仅仅是一种储存介质;它是一种活性固定剂。
快速组织固定
乙醇能迅速渗透生物组织。这种速度对于在分解改变其物理形状之前将生物组织固定在其原始状态至关重要。这种结构刚性对于确保物理测量精度至关重要。
抑制酶活性
一旦进入组织,工业级乙醇就能抑制内部酶的活性。如果没有这种抑制,蜜蜂自身的酶就会从内部开始消化细胞。这个过程可以保护蛋白质免受降解,并保持线粒体 DNA (mtDNA) 的完整性。
低温的作用
虽然乙醇解决了化学稳定性问题,但低温解决了热稳定性和微生物稳定性问题。
阻止微生物生长
将样本储存在例如零下二十摄氏度的温度下,会创造一个不利于细菌和真菌生存的环境。即使在乙醇中,某些微生物在室温下也能存活;冷冻可以确保微生物活动得到有效抑制。
防止化学反应
低温会减慢分子的动能。这可以防止随着时间的推移而降解核酸的自发化学反应。通过保持恒定的低温,您可以防止样本分子结构的逐渐分解。
这对分析的重要性
您的保存质量直接决定了您的数据质量。
翅膀几何形态测量学
对于形态测量学分析,蜜蜂的物理尺寸至关重要。由于高浓度乙醇将样本保持在接近活体组织的状态,翅膀结构不会变形或腐烂。这确保了几何测量能够反映标本的真实表型。
基因组 DNA 提取
遗传分析需要长而完整的 DNA 链。通过防止蛋白质降解和酶活性,这种储存方法确保了基因组 DNA 的完整性。这对于测序实验至关重要,因为片段化的 DNA 可能导致数据质量差或实验失败。
理解权衡
虽然这种方法很有效,但它对环境因素很敏感。
温度波动
稳定性是关键。显著的温度波动会重新启动降解核酸的化学反应。对于跨越多年进行的长期筛选,需要保持稳定的热环境以确保结果的可重复性。
储存时间与温度
虽然 -20°C 对于标准分析足够,但长期生物样本库通常使用超低温(例如 -80°C)。然而,对于此处讨论的翅膀形态测量学和标准基因组提取的具体目标,-20°C 结合乙醇可以提供必要的降解抑制。
根据您的目标做出正确的选择
为了最大化您的样本价值,请将您的储存方案与您的分析终点对齐。
- 如果您的主要重点是翅膀几何形态测量学: 优先使用高浓度乙醇来快速固定组织并防止翅膀结构的物理变形。
- 如果您的主要重点是基因组 DNA 提取: 优先使用乙醇和恒定的冷冻(-20°C)相结合的方法,以阻止线粒体 DNA 的酶促消化。
持续应用这些保存标准可确保您的生物样本成为当前和未来研究可靠的真实来源。
总结表:
| 保存方法 | 主要功能 | 科学影响 |
|---|---|---|
| 高浓度乙醇 | 化学固定和酶抑制 | 防止组织变形并保护线粒体 DNA |
| 低温(-20°C) | 热稳定性与微生物抑制 | 阻止化学降解并防止细菌/真菌生长 |
| 双重方法 | 生物“暂停按钮” | 确保样本在分析时接近活体组织 |
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参考文献
- Diego Armando Masaquiza Moposita, Amílcar Arenal. Use of Wing Geometric Morphometric Analysis and mtDNA to Identify Africanization of Apis mellifera in the Central Highlands of Ecuador. DOI: 10.3390/insects15080628
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